MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)

細胞名稱：MC3T3-E1  Subclone 14     小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14

組織來源：顱頂骨

培養條件：MEMα +10% FBS

形　　態：貼壁；成纖維細胞樣

背　　景：從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。從含抗壞血酸培養基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現出高水平的成骨細胞分化。它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質（ECM）。MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2594）和MC3T3亞克隆30（ATCC CRL-2596）在抗壞血酸中生長表現出很差的成骨細胞分化。不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細胞標記的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨鈣素（OCN），和甲狀旁腺**/甲狀旁腺**相關蛋白受體的mRNA。高或者低的分化潛能的亞克隆在培養中生產出相似數量的膠原質，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細胞相關轉錄因子。植入**缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細胞只是產生纖維組織。這些細胞系是研究體外成骨細胞分化的好模型，尤其是ECM信號。它們和原代培養顱頂成骨細胞的行為類似。

MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)操作說明：

1)對于常溫運輸的細胞，收到細胞后，檢查是否有運輸問題，即細胞培養瓶或管是否破損，細胞培養液是否溢出。若沒有運輸問題，請75%酒精**后，保留封口膜，放入細胞培養箱中靜置。嚴格檢查培養箱的參數：溫度，濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后，細胞狀態穩定后，即可開始后續操作。選用正確的細胞培養體系，MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)嚴格按照說明書的培養條件進行培養。條件允許，培養的前三天內做細胞拍照記錄，通過郵件發送給我們做及時狀態跟蹤。

2)對于干冰運輸的細胞，請取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。然后將其復蘇培養，次日更換培養液。

MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)注意事項：

1)細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當的提高培養基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細胞：在培養過程中若出現細胞分布明顯不均時（即某一區域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養基進行培養。 

MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14)下面介紹幾種細胞培養過程中常見的污染：

一)桿菌污染：培養基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。

二)支原體污染：傳說中的黑焦蟲，長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數情況下是培養用血清。

三)***污染：似乎無處不在，而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細胞上面密布)。培養液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。

四)霉菌污染、比較常見的一種污染，常常來源于污染的空氣、水和器械。