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**技術為您講解試劑盒的結合物

日期:2025-10-20 05:58
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摘要: **技術為您講解試劑盒的結合物 結合物即酶標記的抗體(或抗原),是ELISA中*關鍵的試劑。良好的結合物應該是既保有酶的催化活性,也保持了抗體(或抗原)的**活性。結合物中酶與抗體(或抗原)之間有恰當的分子比例,在結合試劑中應盡量不含有或少含有游離的(未結合的)酶或游離的抗體(或抗原)。此外,結合物尚要有良好的穩定性。 酶 用于ELISA的酶應符合以下要求:純度高,催化反應的轉化率高,專一性強,性質穩定,來源豐富,價格不貴,制備成酶結合物后仍繼續保留它的活性部分和催化能力。*好在受檢標...

**技術為您講解試劑盒的結合物 

結合物即酶標記的抗體(或抗原),是ELISA中*關鍵的試劑。良好的結合物應該是既保有酶的催化活性,也保持了抗體(或抗原)的**活性。結合物中酶與抗體(或抗原)之間有恰當的分子比例,在結合試劑中應盡量不含有或少含有游離的(未結合的)酶或游離的抗體(或抗原)。此外,結合物尚要有良好的穩定性。
    酶
    用于ELISA的酶應符合以下要求:純度高,催化反應的轉化率高,專一性強,性質穩定,來源豐富,價格不貴,制備成酶結合物后仍繼續保留它的活性部分和催化能力。*好在受檢標本中不存在相同的酶。另外,它的相應底物易于制備和保存,價格低廉,有色產物易于測定等。
在ELISA中,常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和堿性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)。在少數商品ELISA試劑中,應用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
    國產ELISA試劑一般都用HRP制備結合物。HRP是一種糖蛋白,含糖量約為18%,分子量為44000,是一種復合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結合而成,是一種卟啉蛋白質。主酶無色糖蛋白在275nm波長處有*高吸收峰,輔基是深棕色的含鐵卟啉環,在403nm波長處有*高吸收峰。HRP的純度用RZ(Reinheit Zahl,德文,意為純度數)表示,是403nm的吸光度與280nm吸光度之比,高純度的HRP的RZ≥7.0。
    HRP除符合上述的ELISA中標記酶的要求外,更有價格低廉和性質較穩定的特點。值得注意的是,在選用酶制劑時,除其純度RZ外,更應注意酶的活力。高純度的酶如保存不當,活力也會降低。酶制劑的活力以所含的酶活力單位表示,可用對底物作用后生成產物量的測定進行試驗。
國外很多ELISA試劑采用堿性磷酸酶(AP)作為標記酶。常用的AP有兩個來源,分別從大腸桿菌和小牛腸膜中提取。不同來源的酶生化特性特性略不相同,從大腸桿菌中提取的AP分子量為80000,酶作用的*適合pH為8.0;用小牛腸膜中提取的AP分子量為100000,*適pH為9.6。在ELISA中,AP系統的敏感度一般高于HRP系統,空白值也較低,但AP價格昂貴,制備結合物所得率也較HRP低。
    抗原和抗體
制備結合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG,以免在與酶聯結時其他雜蛋白的干擾。*好用親和層析純的抗體,這樣全部酶結合物均具有特異的**活性,可以在高稀釋度進行反應,實驗結果本底淺淡。如用F(ab)2進行標記,則更可避免標本中RF的干擾。在ELISA中用酶標抗原的模式不多,總的要**抗原必須是高純度的。
    結合物的稀釋液
用于稀釋高濃度的結合物以配成工作液。為避免結合物在反應中直接吸附在固相載體上,在稀釋緩沖液中常加入高濃度的無關蛋白質(例如1%牛血清白蛋白),通過競爭以抑制結合物的吸附。一般還加入具有抑制蛋白質吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20,0.05%的濃度較為適宜。在間接測定抗體時,血清標本需稀釋后進行測定,也可應用這種稀釋液。

滬公網安備 31011702004399號

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